马铃薯纺锤块茎类病毒RT-qPCR检测技术体系的建立

邱彩玲, 范国权, 申宇, 高艳玲, 张威, 韩树鑫, 张抒, 董学志, 马纪, 白艳菊

Establishment of RT-qPCR Detection System for Potato Spindle Tuber Viroid

Cailing Qiu, Guoquan Fan, Yu Shen, Yanling Gao, Wei Zhang, Shuxin Han, Shu Zhang, Xuezhi Dong, Ji Ma, Yanju Bai

表2 引物及探针设计

Table 2 Design of primers and probes

引物/探针 Primer/Probe 方向 Direction 序列 (5′-3′) Sequence (5′-3′) 备注 Note 反应体系及程序 Reaction system and procedure PSTV 231F 正向引物 GCCCCCTTTGCGCTGT 参考Boonham等[9] 反应体系（10μL）: 引物1（10μmol/L）1μL+引物2（10μmol/L）1μL+探针（10μmol/L）0.4μL+Master Mix（2×）10μL+PCR Grade H2O 5.6mL+质粒/cDNA 2μL 反应程序: 95℃ 10 min,1个循环;95℃ 10s,55℃ 50s,72℃ 1s,45个循环 PSTV 296R 反向引物 AAGCGGTTCTCGGGAGCTT PSTV 234F 正向引物 CCCTTTGCGCTGTCGCTT PSTV 350R 反向引物 TGCGGTTCCAAGGGCTAA PSTV 356R 反向引物 ACCAACTGCGGTTCCAAG 正向引物也使用PSTV 234F PSTV 251T 探针 CAGTTGTTTCCACCGGGTAGT 5′FAM,3′TAMRA,3对引物均用此探针