盐、碱胁迫下水稻种子萌发过程水分含量变化及对种子发芽影响的低场核磁检测研究
Research on the Moisture Content Variation and Influence to Rice Seed Germination under Salt and Alkali Stress by Low Field NMR
通讯作者:
收稿日期: 2022-03-6 修回日期: 2022-05-26
基金资助: |
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Received: 2022-03-6 Revised: 2022-05-26
作者简介 About authors
杨洪伟,研究方向为农业信息化与精准农业,E-mail:
为研究盐、碱胁迫下水稻种子萌发过程水分含量变化及对种子发芽的影响,以及利用低场核磁检测技术测定种子含水量的可行性,利用光照培养箱进行培养皿种子发芽试验,分析了在蒸馏水(对照处理)、浓度为50、150mmol/L NaCl和NaHCO3胁迫处理下,盐粳48和辽星1种子萌发72h过程中核磁信号幅值变化及各处理对发芽指标的影响,确定单位质量水稻种子样品核磁信号幅值与湿基含水率的回归函数关系。结果表明,与对照处理相比,萌发6、24、48、72h后,2个品种水稻种子核磁信号幅值平均分别增长了65%、95%、115%和135%以上。萌发相同时间后,相比对照处理,NaCl和NaHCO3胁迫处理下核磁信号幅值平均降低了5%以上,发芽指数平均降低了4.5%以上,说明水稻种子萌发过程水分含量与种子发芽指数呈正相关。不同浓度NaCl和NaHCO3胁迫下,单位质量水稻种子核磁信号幅值和湿基含水率之间均具有一致的线性关系,R2均大于0.95。说明利用核磁共振技术测定盐、碱胁迫下水稻种子的水分含量是合理可靠的。
关键词:
In order to study the change of moisture content and its effects on the rice seeds germination under salt and alkali stress, and the feasibility of using low field nuclear magnetic detection technology to determine seed moisture content, two varieties (Yanjing 48 and Liaoxing 1) of rice seeds were placed in culture dish with the solution of 50, 150mmol/L NaCl, NaHCO3 and distilled water (control) respectively, nuclear magnetic resonance signal amplitude variation and effects of different solutions on germination characteristics were analyzed, and the regression equation was deduced between NMR signal amplitude per unit mass rice seed samples and the wet base moisture content. The results showed that the nuclear magnetic signal amplitudes of the two varieties of rice seeds increased by 65%, 95%, 115% and 135% respectively after seeds germination 6, 22, 48, and 72h compared with control treatment. After germination for the same time, the amplitude of NMR signal decreased by more than 5% under NaCl and NaHCO3 stress, the germination index decreased by more than 4.5% compared with the control treatment, indicating that there was a positive correlation between moisture content and seed germination index. There was a consistent linear correlation between NMR signal amplitude per unit mass and the wet base moisture content under different NaCl and NaHCO3 stress, R2 were all greater than 0.95. The results showed that it was reasonable and reliable to measure the water content of rice seeds under salt and alkali stress by nuclear magnetic resonance technology.
Keywords:
本文引用格式
杨洪伟, 张丽颖, 李晓辉.
Yang Hongwei, Zhang Liying, Li Xiaohui.
本文以水稻种子为研究对象,以低场核磁共振弛豫谱为技术手段,通过对比相同浓度NaCl和NaHCO3胁迫处理下水稻种子萌发72h过程中发芽指标的变化,分析在盐、碱胁迫下水稻种子萌发过程中的水分吸收及迁移规律,为抗盐碱水稻品种培育和筛选等方面的研究提供无损检测方法和理论依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
供试水稻品种选用耐盐碱性较强的盐粳48和耐盐碱性较弱的辽星1,种子年份为2017年,由辽宁省水稻研究所提供。核磁共振仪(型号:MiNiMR- 60,磁场强度0.5T,上海纽迈电子科技有限公司),HPG-280BX光照培养箱(北京东联哈尔仪器制造有限公司),电热鼓风干燥箱GZX- 9023MBE(上海博讯实业有限公司)。
化学试剂为NaCl、NaHCO3、NaClO和蒸馏水。
1.2 试验方法
1.2.1 样本制备及处理
试验于2017-2018年在北京国家农业信息化工程技术研究中心种子品质检测实验室进行,利用光照培养箱进行培养皿种子发芽试验。挑选籽粒饱满、大小一致的盐粳48(YJ48)、辽星1(LX1)种子各6000粒,每组20粒,共300组,用于检测不同萌发时期种子核磁共振信号及鲜、干质量。另取2个品种水稻种子样本各1000粒,每组100粒,用于种子发芽试验,以上每个处理均设置10个重复。试验前,先对种子进行消毒处理,用3% NaClO溶液浸泡种子3~5min。然后用蒸馏水冲洗3~5次并用吸水纸吸干表面水分,均匀放置于铺有滤纸的培养皿中,在培养皿上书写对应标记。分别用蒸馏水、50、150mmol/L NaCl及50、150mmol/L NaHCO3溶液对各组样本进行萌发处理,溶液用量以浸湿滤纸和种子为宜。将各组样本置于温度为27℃±1℃的HPG-280BX光照培养箱中恒温培养,设置12h光照和12h无光照交替模式。每日更换滤纸和溶液,并记录各组样本发芽种子个数,直到第7天为止。
式中,Gt为第t天发芽种子的数量,Dt为发芽天数。
1.2.2 水稻种子样本核磁共振信号采集
每次进行核磁共振试验前,都需要利用标准油样进行系统校准。首先执行软件的FID序列,标定中心频率及90°、180°脉宽。然后,通过CPMG序列检测样本的核磁共振信号,并将系统采集到的信号平均值导入核磁反演软件,以获得样本的横向弛豫时间(T2)反演谱,通过分析T2反演谱中代表种子样本中包含的束缚水和自由水核磁信号幅值,可以得出水稻种子萌发过程中水分组成及变化规律。
1.2.3 水稻种子样本鲜、干质量检测
将初始及分别萌发至6、24、48、72h的水稻种子样本从培养皿中取出,首先用蒸馏水冲洗3~5次,然后用吸水纸吸干其表面水分,称重,将各组质量平均值作为该组样本的鲜质量,然后将其放入干燥箱中,105℃杀青30min,80℃烘干至恒重,称重,将各组质量平均值作为该组样本干质量。
1.2.4 水稻种子样本湿基含水率NMR检测方法的建立
核磁共振T2反演谱各个峰面积之和与被测样本中包含的氢质子数量成正比,而氢质子主要来源于样本中的水分子,因此每组样本的T2反演谱峰面积之和即代表了该组样本的水分含量多少。利用1.2.2和1.2.3检测的每组样本核磁信号幅值、鲜质量(Wf)和干质量(Wd),可以求出该组样本的湿基含水率(MC),计算公式为:
由此可以通过回归分析推导出单位质量种子样本核磁共振信号幅值与MC的线性回归方程。
1.3 数据处理
采用核磁反演软件和SPSS 19.0进行试验数据分析与处理。文中所有数据均以平均值±标准差表示,P<0.05表示差异达到显著水平。
2 结果与分析
2.1 NaCl和NaHCO3胁迫处理对水稻种子发芽的影响
如表1所示,NaCl和NaHCO3胁迫对水稻种子的发芽指标影响显著(P<0.05),与对照处理相比,2个水稻品种胁迫条件下平均发芽时间延长,发芽指数和发芽率降低。与对照处理相比,盐粳48在50、150mmol/L NaCl胁迫下,平均发芽时间分别延长了0.77和1.00d,发芽指数分别降低了6.26%和8.45%,发芽率分别降低了0.00%和1.33%;在50、150mmol/L NaHCO3胁迫下,平均发芽时间分别延长了0.94和1.14d,发芽指数分别降低了8.65%和10.39%,发芽率分别降低了2.50%和5.83%。辽星1在50和150mmol/L NaCl胁迫下,平均发芽时间分别延长了0.55和1.91d,发芽指数分别降低了4.52%和10.86%,发芽率分别降低了0.00%和4.67%;在50和150mmol/L NaHCO3胁迫下,平均发芽时间分别延长了1.33和2.03d,发芽指数分别降低了6.61%和11.07%,发芽率分别降低了1.33%和9.67%。
表1 NaCl和NaHCO3胁迫处理下水稻种子发芽指标对比
Table 1
水稻品种 Rice variety | 处理 Treatment | 溶液浓度 Solution concentration (mmol/L) | 平均发芽时间 Mean germination time (d) | 发芽指数 Germination index | 发芽势 Germination potential (%) | 发芽率 Germination percentage (%) |
---|---|---|---|---|---|---|
盐粳48 YJ48 | 对照 | 0 | 2.05±0.05cC | 24.67±0.29aA | 97.33±2.31aA | 100.00±0.00aA |
NaCl胁迫 | 50 | 2.82±0.03bB | 18.41±0.11bB | 97.33±2.31aA | 100.00±0.00aA | |
150 | 3.05±0.05aAB | 16.22±0.49cC | 86.00±2.00bB | 98.67±1.15aA | ||
NaHCO3胁迫 | 50 | 2.99±0.08abAB | 16.02±0.40cC | 95.83±3.82aA | 97.50±3.00abA | |
150 | 3.19±0.19aA | 14.28±0.40dD | 88.33±1.44bB | 94.17±4.00bA | ||
辽星1 LX1 | 对照 | 0 | 2.50±0.04cC | 20.89±0.18aA | 90.48±2.36aA | 98.00±0.00aA |
NaCl胁迫 | 50 | 3.05±0.04bB | 16.37±0.37bB | 92.56±1.26aA | 98.00±2.00aA | |
150 | 4.41±0.10aA | 10.03±0.28dD | 88.26±1.37cC | 93.33±4.16bB | ||
NaHCO3胁迫 | 50 | 3.38±0.05bB | 14.28±0.21cC | 92.50.±2.50aA | 96.67±1.00aA | |
150 | 4.53±0.07aA | 9.82±0.17dD | 38.33.±1.44bB | 88.33±1.00cC |
不同小写字母分别表示差异达到显著水平(P < 0.05),不同大写字母表示差异达到极显著水平(P < 0.01),下同
Different lowercase letters indicate significant difference at the 0.05 level, different capital letters indicate extremely significant difference at the 0.01 level, the same below
2.2 NaCl和NaHCO3胁迫下束缚水和自由水核磁信号幅值的变化特征
图1~2为反演频率值=10 000时,不同浓度NaCl和NaHCO3胁迫下盐粳48种子0~72h的T2反演谱对比图,横坐标表示T2,其值越小代表水分子与其他物质结合越紧密,纵坐标表示核磁信号强度。从图1~2中可以看出,不同处理下,盐粳48种子不同萌发时间的反演谱均呈现出2个波峰,由核磁原理可知,短弛豫时间(大峰)代表束缚水信号幅值,长弛豫时间(小峰)代表自由水信号幅值。随着萌发时间延长,束缚水和自由水信号幅值均逐渐增长,相比对照处理,同样胁迫处理下,胁迫浓度越大,束缚水和自由水信号幅值增长幅度越小。萌发相同时间后,相同浓度NaHCO3胁迫处理下束缚水和自由水增长幅度大于NaCl胁迫处理。通过表2~3可以看出,相比盐粳48,辽星1种子在对照处理下,萌发6、24、48和72h后,束缚水核磁信号幅值增长率(A21)分别降低21.39%、26.73%、19.53%和18.73%,自由水核磁信号幅值增长率(A22)分别降低41.90%、81.27%、202.34%和351.78%;50mmol/L NaCl胁迫处理下,A21分别降低18.06%、27.90%、20.78%和20.42%,A22分别降低31.87%、66.03%、168.03%和287.15%;150mmol/L NaCl胁迫处理下,A21分别降低17.17%、25.73%、13.10%和17.99%,A22分别降低35.18%、66.62%、50.32%和239.51%。50mmol/L NaHCO3胁迫处理下,A21分别降低19.44%、28.03%、23.23%和20.92%,A22分别降低35.57%、69.78%、180.00%和259.33%;150mmol/L NaHCO3胁迫处理下,A21分别降低19.06%、26.10%、12.55%和16.50%,A22分别降低36.98%、69.20%、206.86%和270.27%。
图1
图1
NaCl胁迫处理下单位质量盐粳48种子T2反演谱
Fig.1
T2 inversion spectrum of per unit mass YJ48 seed s under NaCl stress
图2
图2
NaHCO3胁迫处理下单位质量盐粳48种子T2反演谱
Fig.2
T2 inversion spectrum of per unit mass YJ48 seeds under NaHCO3 stress
表2 NaCl和NaHCO3胁迫下单位质量盐粳48种子核磁共振信号幅值(A21 and A22)
Table 2
溶液 Solution | 萌发时间 Germination time (h) | 对照CK | 50mmol/L | 150mmol/L | |||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
A21 | A22 | A21 | A22 | A21 | A22 | ||||
NaCl | 初始 | 4497.0±58.6eE | 408.6±8.3eE | 4497.0±58.6eE | 408.6±8.3eE | 4497.0±58.6eE | 408.6±8.3eE | ||
6 | 7594.0±103.3dD | 842.2±37.9dD | 7331.2±95.4dD | 829.5±31.9dD | 7289.6±76.2dD | 854.3±45.2dD | |||
24 | 8874.6±102.3cC | 1052.7±29.8cC | 8868.8±73.3cC | 1026.0±46.4cC | 8809.8±90.6cC | 1028.5±51.5cC | |||
48 | 9248.3±132.1bB | 1806.6±53.3bB | 9319.0±73.9bB | 1725.2±45.8bB | 9510.3±73.5bB | 1180.3±82.4bB | |||
72 | 9059.4±104.5aA | 3023.0±151.1aA | 9458.0±122.0aA | 2523.1±132.5aA | 9055.4±128.2aA | 1979.9±80.1aA | |||
NaHCO3 | 初始 | 4497.0±58.6eE | 408.6±8.3eE | 4497.0±58.6eE | 408.6±8.3eE | 4497.0±58.6eE | 408.6±8.3eE | ||
6 | 7594.0±103.3dD | 842.2±37.9dD | 7394.4±85.6dD | 846.2±42.1dD | 7365.4±68.5dD | 862.3±44.8dD | |||
24 | 8874.6±102.3cC | 1052.7±29.8cC | 8885.4±71.6cC | 1039.9±43.2cC | 8829.7±85.3cC | 1040.3±50.2cC | |||
48 | 9248.3±132.1bB | 1806.6±53.3bB | 9307.1±72.8bB | 1745.1±46.3bB | 9103.2±65.3bB | 1649.3±78.7bB | |||
72 | 9059.4±104.5aA | 3023.0±151.1aA | 9487.8±118.6aA | 2568.3±127.5aA | 9369.9±116.7aA | 2082.8±76.8aA |
表3 NaCl和NaHCO3胁迫下单位质量辽星1种子核磁共振信号幅值A21 and A22
Table 3
溶液 Solution | 萌发时间 Germination time (h) | 对照CK | 50mmol/L | 150mmol/L | |||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
A21 | A22 | A21 | A22 | A21 | A22 | ||||
NaCl | 初始 | 4381.1±49.0eE | 267.4±4.0eE | 4381.1±49.0eE | 267.4±4.0eE | 4381.1±49.0eE | 267.4±4.0eE | ||
6 | 6890.9±86.5dD | 708.3±32.8dD | 6774.1±41.6dD | 733.5±38.8dD | 6733.5±107.6dD | 743.2±22.4dD | |||
24 | 8062.9±68.6cC | 806.4±50.7cC | 8011.5±130.8cC | 827.7±32.0cC | 8013.9±93.7cC | 824.5±27.0cC | |||
48 | 8970.2±80.2bB | 1252.5±48.7bB | 8668.3±103.9bB | 1217.0±46.6bB | 8756.7±138.2bB | 983.0±25.6bB | |||
72 | 8603.4±116.1aA | 2050.5±94.8aA | 8920.2±134.8aA | 1682.4±88.2aA | 8918.4±51.3aA | 1265.3±56.1aA | |||
NaHCO3 | 初始 | 4381.1±49.0eE | 267.4±4.0eE | 4381.1±49.0eE | 267.4±4.0eE | 4381.1±49.0eE | 267.4±4.0eE | ||
6 | 6890.9±86.5dD | 708.3±32.8dD | 6775.1±40.8dD | 736.5±36.7dD | 6747.5±98.6dD | 746.2±20.8dD | |||
24 | 8062.9±68.6cC | 806.4±50.7cC | 8024.2±105.2cC | 829.7±37.6cC | 8021.5±89.2cC | 828.0±22.5cC | |||
48 | 8970.2±80.2bB | 1252.5±48.7bB | 8717.7±98.2bB | 1226.3±42.8bB | 8790.4±125.6bB | 1011.9±21.2bB | |||
72 | 8603.4±116.1aA | 2050.5±94.8aA | 8923.7±102.7aA | 1701.3±75.9aA | 8947.9±48.2aA | 1274.5±20.9aA |
2.3 NaCl和NaHCO3胁迫对萌发过程水稻种子核磁信号幅值的影响
通过表2~3数据发现,在对照处理和不同浓度NaCl、NaHCO3胁迫下,2个品种在0~72h萌发过程中,核磁信号幅值(A21,A22)均极显著增长(P<0.01),因核磁信号幅值可以代表种子中相对水分含量,可知水稻种子萌发过程中水分逐渐增长。以盐粳48为例,相比初始状态,萌发6、24、48、72h后,对照处理下,核磁信号幅值依次增长了71.83%、102.20%、125.17%和146.10%。50mmol/L NaCl胁迫处理下,核磁信号幅值依次增长了66.22%、101.54%、124.95%和144.04%。150mmol/L NaCl胁迫处理下,核磁信号幅值依次增长了65.88%、100.39%、117.75%和124.77%。50mmol/L NaHCO3胁迫处理下,核磁信号幅值依次增长了67.85%、102.16%、125.12%和145.56%。150mmol/L NaHCO3胁迫处理下,核磁信号幅值依次增长了67.59%、101.04%、119.01%和133.27%。
2.4 NaCl、NaHCO3胁迫对2个品种核磁信号幅值影响的比较
NaCl和NaHCO3胁迫处理下,2个品种种子萌发72h过程中核磁信号幅值不断增长,相比对照处理,核磁信号幅值增长幅度显著降低(P<0.05),但萌发相同时间后,NaHCO3胁迫处理下核磁信号幅值增长幅度均大于NaCl胁迫处理(图3a~d)。以盐粳48为例,由表2可知,50和150mmol/L胁迫下,萌发6h后,NaHCO3处理比NaCl处理核磁信号幅值分别提高1.71%和1.63%。萌发24h后,NaHCO3处理比NaCl处理核磁信号幅值分别提高0.62%和0.65%。萌发48h后,NaHCO3处理比NaCl处理核磁信号幅值分别提高0.17%和1.26%。萌发72h后,NaHCO3处理比NaCl处理核磁信号幅值分别提高1.52%和8.50%。
图3
图3
NaCl和NaHCO3胁迫下单位质量盐粳48种子萌发6、24、48、72h后核磁信号幅值对比
不同大小写字母分别表示0.01和0.05水平差异显著
Fig.3
Comparison of NMR signal amplitude of per unit mass YJ48 seeds after germination 6, 24, 48, 72h under NaCl and NaHCO3 stress
The different capital and lowercase letters indicate significant difference at 0.01 and 0.05 levels, respectively
2.5 NaCl、NaHCO3胁迫下核磁信号幅值与水稻种子湿基含水率的关系
在对照和不同浓度NaCl、NaHCO3胁迫处理下,对2个品种0~72h萌发过程核磁信号幅值的检测可以看出,核磁信号幅值不断增长,这与通过烘干称重法得出的MC具有一致的增长趋势。利用数据统计分析软件进行回归分析,NaCl和NaHCO3胁迫处理下,2个品种单位质量核磁信号幅值与MC具有较为一致的线性关系(图4~5)。以盐粳48为例,在NaCl胁迫处理下,回归方程为y= 218.05x+4235(R2=0.9675),对回归方程进行显著性检验,F=3815.27,P<0.05,达到显著水平。在NaHCO3胁迫处理下,回归方程为y=229.56x+ 4185.4(R2=0.9556),对回归方程进行显著性检验,F=2754.11,P<0.05,同样达到显著水平。
图4
图4
NaCl胁迫下单位质量盐粳48种子核磁信号幅值与MC回归分析
Fig.4
Regression between MC and NMR signal amplitude of per unit mass YJ48 seeds under NaCl stress
图5
图5
NaHCO3胁迫下单位质量盐粳48种子核磁信号幅值与MC回归分析
Fig.5
Regression between MC and NMR signal amplitude of per unit mass YJ48 seeds under NaHCO3 stress
3 讨论
3.1 胁迫条件下水稻种子萌发过程中水分含量变化对种子发芽的影响
3.2 胁迫条件下水稻种子萌发过程中水分含量变化
在对照处理、NaCl和NaHCO3胁迫下,2个品种在0~72h萌发过程中,核磁信号幅值均显著增长,可知水稻种子萌发过程中水分逐渐增长。这是因为种子必须吸收足够的水分萌发过程才能进行,前24h属于种子萌发的吸胀吸水阶段,与种子代谢无关,吸水速度较快。快速吸水后,原生质的水合程度趋向饱和,细胞膨压增加,阻碍了细胞进一步吸水,因而24h后吸水速度变慢。随着细胞水合程度增加,酶促反应与呼吸作用增强,种子内的贮藏物质开始分解变成可溶性化合物,这些可溶性分解产物被输送到胚胎中,这一方面为胚胎发育提供了营养,另一方面也降低了胚胎细胞水势,提高了胚胎细胞的吸水能力。在储存养分转化和运输的基础上,大量合成胚根和胚芽中核酸和蛋白质等原生质体的成分,增强了细胞的吸水性,进入生长和吸收阶段。因而种子萌发过程中,核磁信号幅值不断增长[13-14]。
3.3 低场核磁检测技术测定种子含水量的可行性
4 结论
在对照处理、NaCl和NaHCO3胁迫处理下,利用核磁共振技术检测盐粳48和辽星1种子萌发过程水分变化规律与利用传统的烘干称重法得出的水分变化规律是一致的,MC和核磁共振T2总幅值均具有一致的线性关系,说明利用核磁共振技术检测盐、碱胁迫下水稻种子的水分含量是合理可靠的。试验为作物抗盐碱育种研究及指导盐碱地区作物生产提供理论支持和数据参考,同时为逆境下的作物水分含量及转运规律无损检测提供了一种新的方法。
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DOI:10.1007/s11738-014-1593-x URL [本文引用: 1]
Comparative effects of NaCl and NaHCO3 stress on photosynthetic parameters, nutrient metabolism, and the antioxidant system in tomato leaves
DOI:10.1016/j.scienta.2013.03.032 URL [本文引用: 1]
Germination responses of the halophyte Chloris virgata to temperature and reduced water potential caused by salinity, alkalinity and drought stress
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Salt tolerance during seed germination and early seedling stages of 12 halophytes
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Assessing the moisture migration during microwave drying of coal using low-field nuclear magnetic resonance
DOI:10.1080/07373937.2017.1326130 URL [本文引用: 1]
Low-field nuclear magnetic resonance for online determination of water content during sausage fermentation
DOI:10.1016/j.jfoodeng.2017.05.021 URL [本文引用: 1]
Optimization and validation of low field nuclear magnetic resonance sequences to determine low water contents and water profiles in W/O emulsions
DOI:10.1016/j.colsurfa.2013.09.030 URL [本文引用: 1]
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