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作物杂志,2017, 第6期: 37–44 doi: 10.16035/j.issn.1001-7283.2017.06.007

• 遗传育种·种质资源·生物技术 • 上一篇    下一篇

转基因玉米和转基因大豆盲样检测方法

李丽娜,金龙国,谢传晓,刘昌林   

  1. 中国农业科学院作物科学研究所,100081,北京
  • 收稿日期:2017-07-03 修回日期:2017-10-27 出版日期:2017-12-15 发布日期:2018-08-26
  • 通讯作者: 刘昌林
  • 作者简介:李丽娜,在读硕士,主要从事玉米分子育种研究工作
  • 基金资助:
    养分高效利用转基因玉米新品种培育(2016ZX08003005)

Determining Blind Samples of Transgenic Maize and Transgenic Soybean

Li Lina,Jin Longguo,Xie Chuanxiao,Liu Changlin   

  1. Institute of Crop Sciences,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Beijing 100081,China
  • Received:2017-07-03 Revised:2017-10-27 Online:2017-12-15 Published:2018-08-26
  • Contact: Changlin Liu

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3

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148

摘要：

转基因作物商业化发展迅速,中国每年进口大量转基因产品并高度重视我国转基因作物研发,制定了转基因作物及其产品的监管制度。现实迫切需要一套简单、可靠的盲样转基因成分检测方法。该研究以转基因大豆盲样（W160982和W160984）和转基因玉米盲样（W160983和W160985）为研究材料,根据农业部的转基因检测标准,采用普通PCR技术对作物中转基因成分进行检测。通过与标准样品比对并测序,最终确定盲样的转基因成分,玉米盲样W160983转基因成分与标准品MON89034一致,W160985与TC1507一致;大豆盲样W160984与BPS-CV127-9一致,W160982与GTS40-3-2一致。该研究提供并验证了一套玉米和大豆转基因盲样检测的方案,在转基因作物研究生产、进出境检测、监管等方面具有实际应用价值。

关键词: 转基因玉米, 转基因大豆, 盲样, 转基因成分, 检测, 聚合酶链式反应（PCR）

Abstract:

Genetically modified crops developed rapidly in the world. China imports a large amount of products of genetically modified crops every year, and has put billions of money in genetically modified crops research. China also has established regulations for genetically modified crops and their products. Simple and reliable methods for detecting transgenic ingredients are very urgent in China. In this study, according to the detection protocols of genetically modified crops published by the Ministry of Agriculture of the People’s Republic of China, blind samples of soybean (W160982 and W160984) and maize (W160983 and W160985) were detected for transgenic ingredients using the PCR technology. As a result, W160983, W160985, W160982, and W160984 are the standard sample MON89034, TC1507, GTS40-3-2, and BPS-CV127-9, respectively. The results of the blind samples were validated by sequence alignment of the PCR product. This study provided an experimental protocol for the detection of transgenic maize and soybean.

Key words: Transgenic maize, Transgenic soybean, Blind sample, Polymerase chain reaction

表1

玉米和大豆的转基因检测PCR引物"

靶标Target 名称Name 序列(5'→3')Sequence 产物大小Amplicon size (bp) 作物Crop 参考文献Reference
zSSIIb zSSIIb-F CTCCCAATCCTTTGACATCTGC 151 玉米 [9]
zSSIIb-R TCGATTTCTCTCTTGGTGACAGG
MON88017 MON88017-F TTGTCCTGAACCCCTAAAATCC 199 玉米 [10]
MON88017-R CCCGGACATGAAGCCATTTA
GA21 GA21-F CTTATCGTTATGCTATTTGCAACTT 112 玉米 [11]
GA21-R TGGCTCGCGATCCTCCTCGCGTTTC
MIR604 MIR604-F TCGCGCGCGGTGTCATCTATG 142 玉米 [12]
MIR604-R CGCGACACACCTCGTTAGTTAA
MON87460 MON87460-F ATCCACCTGTCAGCTCAAGTT 368
 玉米 [13]
MON87460-R GGTATGTATATAGTGGCGATG
MON89034 MON89034-F GCTGCTACTACTATCAAGCCAATA 207 玉米 [14]
MON89034-R TGCTTTCGCCTATAAATACGAC
MIR162 MIR162-F CCCGGGTCTAGACAATTCAGT 97 玉米 [15]
MIR162-R GCCCAGTAAAACAACTACCACAAG
MON810 MON810-F ACCTCGAGATTTACCTGATCCG 326 玉米 [16]
MON810-R TGCTGCAGGTGGTCTTACATC
MON863 MON863-F GCACTCAAAGACCTGGCGAATGA 411 玉米 [17]
MON863-R CCATCTTTGGGACCACTGTCG
Bt176 Bt176-F TTCAAGCACGGGAACTGGC 270 玉米 [18]
Bt176-R GAGCGAGAACACGAGAAGAGG
DAS-40278-9 DAS-40278-9-F CCATTCAGGAGACCTCGCTTG 238 玉米 [19]
DAS-40278-9-R CGAGCTTCAATCACTTTATGG
TC1507 TC1507-F CTTGTGGTGTTTGTGGCTCT 279 玉米 [20]
TC1507-R TGGCTCCTCCTTCGTATGT
3272 3272-F CTGGCCGATAAACTGACCAT 221 玉米 [21]
3272-R CCAAACGTAAAACGGCTTGT
59122 59122-F CGTCCGCAATGTGTTATTAAG 273 玉米 [22]
59122-R TGACCAAGTGTCCACTTGAC
NK603 NK603-F ATGAATGACCTCGAGTAATCTTGTTAA 108 玉米 [23]
NK603-R AAGAGATAACAGGATCCACTCAAACACT
Lectin Lec-1672F GGGTGAGGATAGGGTTCTCTG 210 大豆 [24]
Lec-1881R GCGATCGAGTAGTGAGAGTCG
GTS40-3-2 GTS40-3-2-F TTCAAACCCTTCAATTTAACCGAT 370 大豆 [25]
GTS40-3-2-R AAGGATAGTGGGATTGTGCGTC
MON89788 MON89788-F CTGCTCCACTCTTCCTTT 223 大豆 [26]
MON89788-R AGACTCTGTACCCTGACCT
MON87701 MON87701-MF GCACGCTTAGTGTGTGTGTCAAAC 150 大豆 [27]
靶标Target 名称Name 序列(5'→3') Sequence 产物大小Amplicon size (bp) 作物Crop 参考文献Reference
MON87701-MR GGATCCGTCGACCTGCAGTTAAC
MON87705 MON87705-F CGCCAAATCGTGAAGTTTCTCATCT 318 大豆 [28]
MON87705-R CAGTGATAACAACACCCTGAGTCT
MON87708 MON87708-F CCATCATACTCATTGCTGATCCA 233 大豆 [29]
MON87708-R AGCCAATCAATCTCAGAACTGTC
MON87769 MON87769-F CCGGACATGAAGCCATTTAC 298 大豆 [30]
MON87769-R TCCTTGGAGGTCGTCTCATT
BPS-CV127-9 CV127-F CCTTCGCCGTTTAGTGTATAGG 238 大豆 [31]
CV127-R AGCAGGTTCGTTTAAGGATGAA
305423 305423-F CGTCAGGAATAAAGGAAGTACAGTA 235 大豆 [32]
305423-R GCCCTAAAGGATGCGTATAGAGT
356043 356043-F CTTTTGCCCGAGGTCGTTAG 145 大豆 [33]
356043-R GCCCTTTGGTCTTCTGAGACTG

图1

转基因玉米和转基因大豆基因组DNA电泳检测"

图2

玉米转基因成分检测 M为DL2000 Marker,B为空白对照,N为阴性对照,下同。Ⅰ：a~e组分别表示对转基因成分MON88017、GA21、MIR604、MON8746、MON89034的检测;Ⅱ：a~e组分别表示对转基因成分MIR162、MON810、MON863、Bt176、DAS40278-9的检测;Ⅲ：a~d组分别表示对转基因成分TC1507、3272、59122、NK603的检测。1、3、5、7、9是W160985样品,2、4、6、8、10是W160983样品"

图3

大豆转基因成分检测 Ⅰ：a~e组分别表示对转基因成分GTS40-3-2、MON89788、MON87701、MON87705、MON87708的检测;Ⅱ：a~d组分别表示对转基因成分MON87769、BPS-CV127-9、305423、356043的检测。1、3、5、7、9是 W160982样品,2、4、6、8、10是W160984样品"

图4

玉米样品目的基因的检测与内参基因zSSIIb的验证 S是阳性对照（S1：TC1507,S2：MON89034）,1：W160985,2：W160983。Ⅰ为内参基因zSSIIb的检验结果;Ⅱ为W160985目的基因（TC1507）的验证,Ⅲ为W160983目的基因（MON89034）的验证"

图5

大豆样品目的基因的检测与内参基因Lectin的验证 S是阳性对照（S1：GTS40-3-2,S2：BPS-CV127-9）。1：W160982,2：W160984。Ⅰ为内参基因Lectin的检验结果;Ⅱ为W160984目的基因（BPS-CV127-9）的验证,Ⅲ为W160982目的基因（GTS40-3-2）的验证"

图6

序列比对结果 方框指示引物序列。Ⅰ为MON89034与W160983的序列比对结果,Ⅱ为TC1507与W160985的序列比对结果,Ⅲ为GTS40-3-2与W160982的序列比对结果,Ⅳ为BPS-CV127-9与W160984的序列比对结果"

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