作物杂志,2016, 第5期: 160–166 doi: 10.16035/j.issn.1001-7283.2016.05.028

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两种配方快速分离纯化马铃薯致病疫霉菌株效果的比较

王蓓蓓1,蒋继志1,李颖1,万安琪1,桂春爽1,黄英菊1,杨志辉2,朱杰华2   

  1. 1 河北大学生命科学学院,071002,河北保定
    2 河北农业大学植物保护学院,071001,河北保定
  • 收稿日期:2016-06-28 修回日期:2016-08-24 出版日期:2016-10-15 发布日期:2018-08-26
  • 通讯作者: 蒋继志
  • 作者简介:王蓓蓓,在读硕士,专业方向为生物化学与分子生物学
  • 基金资助:
    公益性行业(农业)科研专项(201303018)

Comparison of Isolation Efficiency of Phytophthora infestans with Two Antibiotics Formulas

Wang Beibei1,Jiang Jizhi1,Li Ying1,Wan Anqi1,Gui Chunshuang1,Huang Yingju1,Yang Zhihui2,Zhu Jiehua2   

  1. 1 College of Life Sciences,Hebei University,Baoding 071002,Hebei,China
    2 College of Plant Protection,Agricultural University of Hebei,Baoding 071001,Hebei,China
  • Received:2016-06-28 Revised:2016-08-24 Online:2016-10-15 Published:2018-08-26
  • Contact: Jizhi Jiang

摘要:

为了能在田间快速分离马铃薯致病疫霉菌株,同时能将实验室内被污染的致病疫霉菌株有效地纯化出来,对在黑麦培养基中添加制霉菌素配方和红药水配方分离致病疫霉菌株的效果进行了比较。结果显示,从田间马铃薯病叶上直接分离致病疫霉菌株时,制霉菌素配方的纯化率高于红药水配方,分别为74%和52%;在分离实验室受杂菌污染的致病疫霉菌株时,红药水配方的纯化率高于制霉菌素配方,分别为78%和36%;两种配方对致病疫霉菌株后期生长均有一定的抑制作用,其中制霉菌素配方的抑制作用明显强于红药水配方,两者的生长抑制率分别为65.79%和18.63%;然而,两种配方对致病疫霉菌株后期产生孢子囊的数量、孢子囊直接萌发和游动孢子释放、致病疫霉菌丝体的可溶性蛋白含量都没有显著影响,同时在3个感病马铃薯品种上的致病性也均没有明显影响。田间病叶上采集的致病疫霉菌株在制霉菌素配方的黑麦培养基冻存管中20℃最长可保存16个月,表明制霉菌素配方更适合于田间快速分离纯化致病疫霉菌株,而红药水配方更适合于分离纯化实验室内被污染的致病疫霉菌株。

关键词: 致病疫霉, 马铃薯, 制霉菌素, 红药水, 分离纯化

Abstract:

The isolation of Phytophthora infestans strains from diseased leaves of potato in field and from the media of contaminating microorganism in lab is difficult with traditional method. The purpose of this experiment is to compare the isolation efficiency of P. infestans by Nystatin formula and Merbromin formula in rye culture medium. The results showed that purification rates of Nystatin formula and Merbromin formula was 74% and 52% from diseased potato leaves in field, respectively, but that were 36% and 78% from the media of contaminating microorganism in lab, respectively. The two formulas had some inhibition on mycelia growth of P. infestans and Merbromin formula displayed stronger inhibition in comparison with Nystatin formula, the inhibition rates were 65.79% and 18.63%, respectively. However, the two formulations had no significant effect on spoangia formation, sporangia direct germination, and zoospores release, as well as the mycelia protein content of P.infestans. In addition, both Nystatin formula and Merbromin formula did not affect the pathogenicity of P. infestans on potato tuber slices of tested three varieties. The strains isolated from diseased potato leaves in field could be kept for 16 months in frozen storage tube of rye culture medium adding Nystatin formula. These findings indicate that Nystatin formula is suitable for isolation of P. infestans strains from field and Merbromin formula for that from lab.

Key words: Phytophthora infestans, Potato, Nystatin, Merbromin, Isolation and purification

图1

添加两种抗生素配方的黑麦培养基小管及其田间对致病疫霉菌株的直接分离 A:制霉菌素配方Nystatin formula;B:红药水配方Merbromin formula;The same below"

图2

添加两种抗生素配方黑麦培养基在田间直接分离纯化致病疫霉菌株的效果 C:对照Control.The same below"

表1

两种抗生素配方在田间直接分离致病疫霉菌落直径比较"

处理Treatment 从冻存管转接致病疫霉后的培养时间Incubation time of P.infestansstrains from frozen storage tube (d)
4 5 6 7 8
制霉菌素配方Nystatin formula 44.7a/3.7a 56.3a/11.0a 69.0a/18.3a 79.3a/22.0a N/M
红药水配方Merbromin formula 25.0b/122.7b 29.3b/143.7b 35.3b/158.0b 37.0b/161.7b N/M
对照Control 42.7a/126.0b N/147.7b N/M N/M N/M

表2

两种抗生素配方分离实验室受杂菌污染致病疫霉菌落直径比较"

处理Treatment 从污染平板上转接致病疫霉后的培养时间(d)
Incubation time of P.infestans strains from contaminating microorganism
3 4 5 6 7 8 9
制霉菌素配方Nystatin formula 9.6b/3.7b 14.1b/11.0b 19.3b/18.3b 24.5b/22.0b 36.7b/23.5b N/M N/M
红药水配方Merbromin formula 23.4a/122.7a 34.2a/143.7a 42.6a/158.0a 53.6a/161.7a 61.5a/172.2a 68.3a/178.4a N/M
对照Control 26.6a/126.0a 31.2/147.7a N/M N/M N/M N/M N/M

图3

两种抗生素配方对致病疫霉后期生长的影响"

表3

两种抗生素配方对致病疫霉产孢量的影响"

处理Treatment 每视野中的孢子囊个数Number of sporangia per field of vision 平均值Mean
制霉菌素配方Nystatin formula 31 23 38 24 28 24 20 14 15 28 24.5
红药水配方Merbromin formula 19 20 18 23 37 14 13 28 30 36 23.8
对照Control 26 38 27 11 30 35 15 32 23 42 27.9

图4

两种抗生素配方对致病疫霉致病性的影响"

表4

两种抗生素对致病疫霉菌株孢子囊萌发和游动孢子释放的影响"

处理
Treatment
游动孢子释放率
Zoospores release rate
抑制率
Suppression rate
孢子囊直接萌发率
Sporangia direct germination rate
抑制率
Suppression rate
制霉菌素配方Nystatin formula 48.75a 3.79 45.73a 12.06
红药水配方Merbromin formula 46.58a 8.07 46.39a 10.79
对照Control 50.67 - 52.00 -

图5

蛋白质含量标准曲线"

图6

不同处理对致病疫霉菌丝可溶性蛋白的影响"

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